Tankewol foar jo besite oan nature.com. De browserferzje dy't jo brûke hat beheinde CSS-stipe. Foar de bêste ûnderfining advisearje wy de lêste browserferzje te brûken (of de kompatibiliteitsmodus yn Internet Explorer út te skeakeljen). Derneist, om trochgeande stipe te garandearjen, sil dizze side gjin stilen of JavaScript befetsje.
Dizze stúdzje rapportearret in tige effisjinte metoade foar de synteze fan benzoxazolen mei gebrûk fan katechol, aldehyde en ammoniumacetaat as feedstock fia in koppelingsreaksje yn ethanol mei ZrCl4 as katalysator. In searje benzoxazolen (59 typen) waarden mei súkses synthesisearre mei dizze metoade yn opbringsten oant 97%. Oare foardielen fan dizze oanpak omfetsje grutskalige synteze en it gebrûk fan soerstof as oksidaasjemiddel. De mylde reaksjeomstannichheden meitsje lettere funksjonalisaasje mooglik, wat de synteze fan ferskate derivaten mei biologysk relevante struktueren lykas β-laktamen en kinolineheterocyclen fasilitearret.
De ûntwikkeling fan nije metoaden foar organyske synteze dy't de beheiningen by it krijen fan weardefolle ferbiningen oerwinne kinne en har ferskaat fergrutsje (om nije potinsjele tapassingsgebieten te iepenjen) hat in soad oandacht lutsen yn sawol de akademy as de yndustry1,2. Neist de hege effisjinsje fan dizze metoaden sil de miljeufreonlikens fan 'e oanpakken dy't ûntwikkele wurde ek in wichtich foardiel wêze3,4.
Benzoxazolen binne in klasse heterosyklyske ferbiningen dy't in soad oandacht lutsen hawwe fanwegen har rike biologyske aktiviteiten. Sokke ferbiningen binne rapportearre om antimikrobiële, neurobeskermjende, antykanker-, antivirale, antibakteriële, antifungale en anty-inflammatoire aktiviteiten te hawwen5,6,7,8,9,10,11. Se wurde ek in soad brûkt yn ferskate yndustriële fjilden, ynklusyf farmaseutika, sensorika, agrochemy, liganden (foar oergongsmetaalkatalyse) en materiaalkunde12,13,14,15,16,17. Fanwegen har unike gemyske eigenskippen en alsidichheid binne benzoxazolen wichtige boublokken wurden foar de synteze fan in protte komplekse organyske molekulen18,19,20. Nijsgjirrich is dat guon benzoxazolen wichtige natuerlike produkten en farmakologysk relevante molekulen binne, lykas nakijinol21, boxazomycin A22, calcimycin23, tafamidis24, cabotamycin25 en neosalvianeen (Ofbylding 1A)26.
(A) Foarbylden fan natuerlike produkten en bioaktive ferbiningen op basis fan benzoxazol. (B) Guon natuerlike boarnen fan katecholen.
Katecholen wurde in soad brûkt yn in protte fjilden lykas farmaseutika, kosmetika en materiaalkunde27,28,29,30,31. Katecholen hawwe ek oantoand antioxidant- en anty-inflammatoire eigenskippen te hawwen, wêrtroch't se potinsjele kandidaten binne as terapeutyske aginten32,33. Dizze eigenskip hat laat ta it gebrûk yn 'e ûntwikkeling fan anti-aging kosmetika en hûdsoarchprodukten34,35,36. Fierder binne katecholen oantoand effektive foarrinners te wêzen foar organyske synteze (figuer 1B)37,38. Guon fan dizze katecholen binne oerfloedich yn 'e natuer. Dêrom kin it gebrûk as grûnstof of útgongsmateriaal foar organyske synteze it griene skiekundeprinsipe fan "it brûken fan duorsume boarnen" belichemme. Ferskate ferskillende rûtes binne ûntwikkele om funksjonalisearre benzoxazoleferbiningen te meitsjen7,39. Oksidative funksjonalisaasje fan 'e C(aryl)-OH-bining fan katecholen is ien fan 'e meast nijsgjirrige en nije oanpakken foar de synteze fan benzoxazolen. Foarbylden fan dizze oanpak yn 'e synteze fan benzoxazolen binne reaksjes fan katecholen mei aminen40,41,42,43,44, mei aldehyden45,46,47, mei alkoholen (of ethers)48, lykas mei ketonen, alkenen en alkynen (figuer 2A)49. Yn dizze stúdzje waard in multikomponintreaksje (MCR) tusken katechol, aldehyd en ammoniumacetaat brûkt foar de synteze fan benzoxazolen (figuer 2B). De reaksje waard útfierd mei in katalytyske hoemannichte ZrCl4 yn ethanoloplosmiddel. Tink derom dat ZrCl4 beskôge wurde kin as in griene Lewis-soerkatalysator, it is in minder giftige ferbining [LD50 (ZrCl4, oraal foar rotten) = 1688 mg kg−1] en wurdt net beskôge as heul giftich50. Sirkoniumkatalysatoren binne ek mei súkses brûkt as katalysatoren foar de synteze fan ferskate organyske ferbiningen. Harren lege kosten en hege stabiliteit foar wetter en soerstof meitsje se beloftefolle katalysatoren yn organyske synteze51.
Om geskikte reaksjebetingsten te finen, hawwe wy 3,5-di-tert-butylbenzeen-1,2-diol 1a, 4-metoksybenzaldehyd 2a en ammoniumsâlt 3 selektearre as modelreaksjes en de reaksjes útfierd yn 'e oanwêzigens fan ferskate Lewis-soeren (LA), ferskate oplosmiddels en temperatueren om benzoxazol 4a te synthesisearjen (Tabel 1). Gjin produkt waard waarnommen yn 'e ôfwêzigens fan katalysator (Tabel 1, yngong 1). Dêrnei waarden 5 mol% fan ferskate Lewis-soeren lykas ZrOCl2.8H2O, Zr(NO3)4, Zr(SO4)2, ZrCl4, ZnCl2, TiO2 en MoO3 testen as katalysatoren yn EtOH-oplosmiddel en ZrCl4 die bliken it bêste te wêzen (Tabel 1, yngongen 2–8). Om de effisjinsje te ferbetterjen, waarden ferskate oplosmiddels testen, ynklusyf dioxaan, acetonitril, etylacetaat, dichlooretaan (DCE), tetrahydrofuraan (THF), dimethylformamide (DMF) en dimethylsulfokside (DMSO). De opbringsten fan alle testte oplosmiddels wiene leger as dy fan ethanol (Tabel 1, yngongen 9–15). It brûken fan oare stikstofboarnen (lykas NH4Cl, NH4CN en (NH4)2SO4) ynstee fan ammoniumacetaat ferbettere de reaksjeopbringst net (Tabel 1, yngongen 16–18). Fierdere stúdzjes lieten sjen dat temperatueren ûnder en boppe 60 °C de reaksjeopbringst net ferbetteren (Tabel 1, yngongen 19 en 20). Doe't de katalysatorlading feroare waard nei 2 en 10 mol%, wiene de opbringsten respektivelik 78% en 92% (Tabel 1, yngongen 21 en 22). De opbringst naam ôf doe't de reaksje útfierd waard ûnder in stikstofatmosfear, wat oanjout dat atmosfearyske soerstof in wichtige rol kin spylje yn 'e reaksje (Tabel 1, yngong 23). It ferheegjen fan 'e hoemannichte ammoniumacetaat ferbettere de reaksjeresultaten net en fermindere sels de opbringst (Tabel 1, yngongen 24 en 25). Derneist waard gjin ferbettering yn 'e reaksjeopbringst waarnommen mei it ferheegjen fan 'e hoemannichte katechol (Tabel 1, yngong 26).
Nei it bepalen fan 'e optimale reaksjebetingsten waarden de alsidichheid en tapassingsmooglikheden fan 'e reaksje bestudearre (Ofbylding 3). Om't alkynen en alkenen wichtige funksjonele groepen hawwe yn organyske synteze en maklik geskikt binne foar fierdere derivatisaasje, waarden ferskate benzoxazolderivaten synthetisearre mei alkynen en alkynen (4b–4d, 4f–4g). Mei 1-(prop-2-yn-1-yl)-1H-indool-3-carbaldehyde as it aldehyde-substraat (4e) berikte de opbringst 90%. Derneist waarden alkylhalo-substituearre benzoxazolen yn hege opbringsten synthetisearre, dy't brûkt wurde kinne foar ligaasje mei oare molekulen en fierdere derivatisaasje (4h–4i) 52. 4-((4-fluorbenzyl)oxy)benzaldehyde en 4-(benzyloxy)benzaldehyde joegen de oerienkommende benzoxazolen 4j en 4k yn hege opbringsten, respektivelik. Mei dizze metoade hawwe wy mei súkses benzoxazolderivaten (4l en 4m) synthetisearre dy't kinolone-eleminten befetsje53,54,55. Benzoxazol 4n mei twa alkyngroepen waard synthetisearre yn in opbringst fan 84% út 2,4-substituearre benzaldehyden. De bisyklyske ferbining 4o mei in indoolheterosyklus waard mei súkses synthetisearre ûnder optimalisearre omstannichheden. Ferbining 4p waard synthetisearre mei in aldehydsubstraat ferbûn oan in benzonitrilgroep, wat in nuttich substraat is foar de tarieding fan (4q-4r) supramolekulen56. Om de tapasberens fan dizze metoade te markearjen, waard de tarieding fan benzoxazolmolekulen mei β-laktam-eleminten (4q-4r) ûnder optimalisearre omstannichheden demonstrearre fia de reaksje fan aldehyde-funksjonalisearre β-laktamen, katechol en ammoniumacetaat. Dizze eksperiminten litte sjen dat de nij ûntwikkele synthetyske oanpak brûkt wurde kin foar funksjonalisaasje fan komplekse molekulen yn in lette faze.
Om de alsidichheid en tolerânsje fan dizze metoade foar funksjonele groepen fierder te demonstrearjen, hawwe wy ferskate aromatyske aldehyden bestudearre, ynklusyf elektron-donearjende groepen, elektron-oanlûkende groepen, heterosyklyske ferbiningen en polysyklyske aromatyske koalwetterstoffen (Ofbylding 4, 4s–4aag). Bygelyks, benzaldehyde waard omset yn it winske produkt (4s) yn in isolearre opbringst fan 92%. Aromatyske aldehyden mei elektron-donearjende groepen (ynklusyf -Me, isopropyl, tert-butyl, hydroxyl en para-SMe) waarden mei súkses omset yn 'e oerienkommende produkten yn poerbêste opbringsten (4t–4x). Sterysk hindere aldehydesubstraten koenen benzoxazoleprodukten (4y–4aa, 4al) generearje yn goede oant poerbêste opbringsten. It gebrûk fan meta-substituearre benzaldehyden (4ab, 4ai, 4am) makke de tarieding fan benzoxazoleprodukten yn hege opbringsten mooglik. Halogenearre aldehyden lykas (-F, -CF3, -Cl en Br) joegen de oerienkommende benzoxazolen (4af, 4ag en 4ai-4an) yn befredigjende opbringsten. Aldehyden mei elektronen-oanlûkende groepen (bygelyks -CN en NO2) reagearren ek goed en joegen de winske produkten (4ah en 4ao) yn hege opbringsten.
Reaksjesearje brûkt foar de synteze fan aldehyden a en b. a Reaksjebetingsten: 1 (1,0 mmol), 2 (1,0 mmol), 3 (1,0 mmol) en ZrCl4 (5 mol%) waarden 6 oeren by 60 °C reagearre yn EtOH (3 mL). b De opbringst komt oerien mei it isolearre produkt.
Polysyklyske aromatyske aldehyden lykas 1-naftaldehyd, antraseen-9-karboksaldehyd en fenantreen-9-karboksaldehyd koene de winske produkten 4ap-4ar yn hege opbringsten generearje. Ferskate heterosyklyske aromatyske aldehyden, ynklusyf pyrrool, indool, pyridine, furan en thiofeen, tolerearren de reaksjeomstannichheden goed en koene de oerienkommende produkten (4as-4az) yn hege opbringsten generearje. Benzoxazol 4aag waard krigen yn 52% opbringst mei it oerienkommende alifatyske aldehyd.
Reaksjegebiet mei kommersjele aldehyden a, b. a Reaksjebetingsten: 1 (1,0 mmol), 2 (1,0 mmol), 3 (1,0 mmol) en ZrCl4 (5 mol%) waarden 4 oeren by 60 °C yn EtOH (5 mL) reagearre. b De opbringst komt oerien mei it isolearre produkt. c De reaksje waard 6 oeren by 80 °C útfierd; d De reaksje waard 24 oeren by 100 °C útfierd.
Om de alsidichheid en tapasberens fan dizze metoade fierder te yllustrearjen, hawwe wy ek ferskate substituearre katekolen testen. Monosubstituearre katekolen lykas 4-tert-butylbenzeen-1,2-diol en 3-metoksybenzeen-1,2-diol reagearren goed mei dit protokol, wêrtroch't benzoxazolen 4aaa-4aac ûntstienen yn opbringsten fan respektivelik 89%, 86% en 57%. Guon polysubstituearre benzoxazolen waarden ek mei súkses synthetisearre mei de oerienkommende polysubstituearre katekolen (4aad-4aaf). Gjin produkten waarden krigen doe't elektron-tekoart substituearre katekolen lykas 4-nitrobenzeen-1,2-diol en 3,4,5,6-tetrabromobenzeen-1,2-diol waarden brûkt (4aah-4aai).
De synteze fan benzoxazol yn gram-hoemannichten waard mei súkses útfierd ûnder optimalisearre omstannichheden, en ferbining 4f waard synthetisearre yn in isolearre opbringst fan 85% (figuer 5).
Gram-skaal synteze fan benzoxazol 4f. Reaksjebetingsten: 1a (5,0 mmol), 2f (5,0 mmol), 3 (5,0 mmol) en ZrCl4 (5 mol%) waarden reagearre yn EtOH (25 mL) by 60 °C foar 4 oeren.
Op basis fan literatuergegevens is in ridlik reaksjemeganisme foarsteld foar de synteze fan benzoxazolen út catechol, aldehyde en ammoniumasetaat yn 'e oanwêzigens fan in ZrCl4-katalysator (Ofbylding 6). Catechol kin sirkonium chelearje troch twa hydroxylgroepen te koördinearjen om de earste kearn fan 'e katalytyske syklus (I)51 te foarmjen. Yn dit gefal kin de semichinon-groep (II) foarme wurde fia enol-keto-tautomerisaasje yn kompleks I58. De karbonylgroep foarme yn tuskenprodukt (II) reagearret blykber mei ammoniumasetaat om de tuskenprodukt imine (III) 47 te foarmjen. In oare mooglikheid is dat de imine (III^), foarme troch de reaksje fan it aldehyde mei ammoniumasetaat, reagearret mei de karbonylgroep om de tuskenprodukt imine-fenol (IV) 59,60 te foarmjen. Dêrnei kin tuskenprodukt (V) intramolekulêre syklisaasje ûndergean40. Uteinlik wurdt tuskenprodukt V oksidearre mei atmosfearyske soerstof, wêrtroch it winske produkt 4 ûntstiet en it sirkoniumkompleks frijkomt om de folgjende syklus61,62 te begjinnen.
Alle reagentia en oplosmiddels waarden kocht fan kommersjele boarnen. Alle bekende produkten waarden identifisearre troch ferliking mei spektrale gegevens en smeltpunten fan testmonsters. 1H NMR (400 MHz) en 13C NMR (100 MHz) spektra waarden opnommen op in Brucker Avance DRX-ynstrumint. Smeltpunten waarden bepaald op in Büchi B-545-apparaat yn in iepen kapillêr. Alle reaksjes waarden kontroleare troch tinnelaachchromatografy (TLC) mei silikagelplaten (Silica gel 60 F254, Merck Chemical Company). Elementêre analyze waard útfierd op in PerkinElmer 240-B Microanalyzer.
In oplossing fan katechol (1,0 mmol), aldehyde (1,0 mmol), ammoniumasetaat (1,0 mmol) en ZrCl4 (5 mol%) yn ethanol (3,0 mL) waard efterinoar roerd yn in iepen buis yn in oaljebad by 60 °C ûnder loft foar de fereaske tiid. De foarútgong fan 'e reaksje waard kontroleare troch tinnelaachchromatografy (TLC). Nei foltôging fan 'e reaksje waard it resultearjende mingsel ôfkuolle nei keamertemperatuer en waard ethanol ûnder ferlege druk fuorthelle. It reaksjemingsel waard ferdund mei EtOAc (3 x 5 mL). Dêrnei waarden de kombineare organyske lagen droege oer wetterfrije Na2SO4 en yn fakuüm konsintrearre. Uteinlik waard it rûge mingsel suvere troch kolomchromatografy mei petroleumether/EtOAc as eluent om suvere benzoxazole 4 te jaan.
Gearfetsjend hawwe wy in nij, myld en grien protokol ûntwikkele foar de synteze fan benzoxazolen fia sekwinsjele foarming fan CN- en CO-biningen yn 'e oanwêzigens fan in sirkoniumkatalysator. Under de optimalisearre reaksjebetingsten waarden 59 ferskillende benzoxazolen synthetisearre. De reaksjebetingsten binne kompatibel mei ferskate funksjonele groepen, en ferskate bioaktive kearnen waarden mei súkses synthetisearre, wat oanjout dat se in hege potinsjeel hawwe foar lettere funksjonalisaasje. Dêrom hawwe wy in effisjinte, ienfâldige en praktyske strategy ûntwikkele foar de grutskalige produksje fan ferskate benzoxazolderivaten út natuerlike katekolen ûnder griene omstannichheden mei help fan goedkeape katalysatoren.
Alle gegevens dy't tidens dizze stúdzje binne krigen of analysearre, binne opnommen yn dit publisearre artikel en de oanfoljende ynformaasjebestannen.
Nicolaou, Kansas City. Organyske synteze: de keunst en wittenskip fan it kopiearjen fan biologyske molekulen dy't yn 'e natuer fûn wurde en it meitsjen fan ferlykbere molekulen yn it laboratoarium. Proc. R Soc. A. 470, 2013069 (2014).
Ananikov VP et al. Untwikkeling fan nije metoaden foar moderne selektive organyske synteze: it krijen fan funksjonalisearre molekulen mei atomêre presyzje. Russ Chem. Ed. 83, 885 (2014).
Ganesh, KN, et al. Griene skiekunde: Stifting foar in duorsume takomst. Organysk, Proses, Undersyk en Untwikkeling 25, 1455–1459 (2021).
Yue, Q., et al. Trends en kânsen yn organyske synteze: steat fan wrâldwide ûndersyksyndikatoaren en foarútgong yn presyzje, effisjinsje en griene skiekunde. J. Org. Chem. 88, 4031–4035 (2023).
Lee, SJ en Trost, BM Green gemyske synteze. PNAS. 105, 13197–13202 (2008).
Ertan-Bolelli, T., Yildiz, I. en Ozgen-Ozgakar, S. Synteze, molekulêre docking en antibakteriële evaluaasje fan nije benzoxazolderivaten. Honey. Chem. Res. 25, 553–567 (2016).
Sattar, R., Mukhtar, R., Atif, M., Hasnain, M. en Irfan, A. Syntetyske transformaasjes en bioscreening fan benzoxazolderivaten: in oersjoch. Journal of Heterocyclic Chemistry 57, 2079–2107 (2020).
Yildiz-Oren, I., Yalcin, I., Aki-Sener, E. en Ukarturk, N. Synteze en struktuer-aktiviteitsrelaasjes fan nije antimikrobiële aktive polysubstituearre benzoxazolderivaten. European Journal of Medicinal Chemistry 39, 291–298 (2004).
Akbay, A., Oren, I., Temiz-Arpaci, O., Aki-Sener, E. en Yalcin, I. Synteze fan guon 2,5,6-substituearre benzoxazole-, benzimidazole-, benzothiazole- en oxazolo(4,5-b)pyridine-derivaten en harren remmende aktiviteit tsjin HIV-1 reverse transkriptase. Arzneimittel-Forschung/Drug Res. 53, 266–271 (2003).
Osmanieh, D. et al. Synteze fan guon nije benzoxazolderivaten en stúdzje fan har antykankeraktiviteit. European Journal of Medicinal Chemistry 210, 112979 (2021).
Rida, SM, et al. Guon nije benzoxazolderivaten binne synthetisearre as antikanker-, anti-HIV-1- en antibakteriële aginten. European Journal of Medicinal Chemistry 40, 949–959 (2005).
Demmer, KS en Bunch, L. Tapassing fan benzoxazolen en oxazolopyridinen yn ûndersyk nei medisinale skiekunde. European Journal of Medicinal Chemistry 97, 778–785 (2015).
Paderni, D., et al. In nije benzoxazolyl-basearre fluoreszinte makrosyklyske chemosensor foar optyske deteksje fan Zn2+ en Cd2+. Chemical Sensors 10, 188 (2022).
Zou Yan et al. Foarútgong yn 'e stúdzje fan benzothiazole en benzoxazole-derivaten yn 'e ûntwikkeling fan bestridingsmiddels. Int. J Mol. Sci. 24, 10807 (2023).
Wu, Y. et al. Twa Cu(I)-kompleksen konstruearre mei ferskate N-heterocyclyske benzoxazolliganden: synteze, struktuer en fluoreszinsjeeigenskippen. J. Mol. Struct. 1191, 95–100 (2019).
Walker, KL, Dornan, LM, Zare, RN, Weymouth, RM, en Muldoon, MJ Mechanisme fan 'e katalytyske oksidaasje fan styreen troch wetterstofperokside yn 'e oanwêzigens fan kationyske palladium(II)-kompleksen. Journal of the American Chemical Society 139, 12495–12503 (2017).
Agag, T., Liu, J., Graf, R., Spiess, HW, en Ishida, H. Benzoxazoleharsen: In nije klasse fan thermohardende polymearen ôflaat fan tûke benzoxazineharsen. Macromolecule, Rev. 45, 8991–8997 (2012).
Basak, S., Dutta, S. en Maiti, D. Synteze fan C2-funksjonalisearre 1,3-benzoxazolen fia in oergongsmetaal-katalysearre C-H-aktivaasjebenadering. Chemistry - A European Journal 27, 10533–10557 (2021).
Singh, S., et al. Resinte foarútgong yn 'e ûntwikkeling fan farmakologysk aktive ferbiningen dy't benzoxazolskeletten befetsje. Asian Journal of Organic Chemistry 4, 1338–1361 (2015).
Wong, XK en Yeung, KY. Patentoersjoch fan 'e hjoeddeistige ûntwikkelingsstatus fan it benzoxazolmedisyn. KhimMedKhim. 16, 3237–3262 (2021).
Ovenden, SPB, et al. Sesquiterpenoïde benzoxazolen en sesquiterpenoïde kinonen út 'e marine spons Dactylospongia elegans. J. Nat. Proc. 74, 65–68 (2011).
Kusumi, T., Ooi, T., Wülchli, MR, en Kakisawa, H. Strukturen fan 'e nije antibiotika boksazomycinen a, B, en CJ Am. Chem. Soc. 110, 2954–2958 (1988).
Cheney, ML, DeMarco, PW, Jones, ND, en Occolowitz, JL Struktuer fan 'e divalente kationyske ionofoor A23187. Journal of the American Chemical Society 96, 1932–1933 (1974).
Park, J., et al. Tafamidis: in earste-yn-klasse transthyretine-stabilisator foar de behanneling fan transthyretine-amyloïde kardiomyopaty. Annals of Pharmacotherapy 54, 470–477 (2020).
Sivalingam, P., Hong, K., Pote, J. en Prabakar, K. Streptomyces ûnder ekstreme miljeu-omstannichheden: In potinsjele boarne fan nije antimikrobiële en antikankermedisinen? International Journal of Microbiology, 2019, 5283948 (2019).
Pal, S., Manjunath, B., Gorai, S. en Sasmal, S. Benzoxazole-alkaloïden: foarkommen, skiekunde en biology. Skiekunde en Biology fan Alkaloïden 79, 71–137 (2018).
Shafik, Z., et al. Bionyske ûnderwetterbining en lijmferwidering op oanfraach. Applied Chemistry 124, 4408–4411 (2012).
Lee, H., Dellatore, SM, Miller, VM, en Messersmith, PB Mussel-ynspirearre oerflakgemy foar multifunksjonele coatings. Science 318, 420–426 (2007).
Nasibipour, M., Safai, E., Wrzeszcz, G., en Wojtczak, A. It ôfstimmen fan 'e redokspotinsjeel en katalytyske aktiviteit fan in nij Cu(II)-kompleks mei O-iminobenzosemiquinone as in elektronopslachligand. Nov. Russ. Chemistry, 44, 4426–4439 (2020).
D'Aquila, PS, Collu, M., Jessa, GL en Serra, G. De rol fan dopamine yn it wurkingsmeganisme fan antidepressiva. European Journal of Pharmacology 405, 365–373 (2000).